Anticuerpos monoclonales específicos para herpesvirus bovino tipo-1 (cepa Cooper)

Abstract

Anticuerpos monoclonales fueron preparados contra herpesvirus bovino tipo 1 (BHV-1) purificado y se seleccionaron varios de acuerdo con su habilidad de neutralizar la infectividad viral. El virus fue purificado por dos métodos alternativos de concentración, con polietilenglicol seguido de ultracentrifugación sobre un colchón de sacarosa al 25 por ciento (p/p) o usando un gradiente linear de tartrato de potasio. De un total de 204 líneas celulares que segregaban anticuerpos para el virus, obtenidas en dos fusiones, se seleccionaron y expandieron clonalmente 39 hibridomas. La selección se basó en su reactividad específica por ELISA. De éstos, 11 anticuerpos monoclonales fueron capaces de neutralizar BHV-1 total o parcialmente, con o sin el agregado de complemento. Siete anticuerpos monoclonales fueron producidos (en la forma de fluido ascítico) y purificados por precipitación en sulfato de amonio. De éstos, dos fueron capaces de prevenir la penetración de virión luego de su adherencia a la células. Asimismo, tres anticuerpos monoclonales fueron seleccionados para ser usados en las pruebas de inmunoperoxidasa para la detección del BHV-1 en cultivos celulares infectados.

Monoclonal antibodies (McAbs) were prepared against purified Bovine Herpesvirus Type-(BHV-1) and selected for their ability to neutralize viral infectivity. Viral purification was performed by polyethylene glycol concentration and ultracentrifugation on a 25% (w/w) sucrose cushion, and by potassium tartrate linear gradient. Out of 204 cell lines expressing antobodies to the virus, obtained in two fusions, 39 hybridomas were selected and cloned based on enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) reactivity. Eleven McAbs were able to neutralize BHV-1 partially or totally, with or without complement. Seven McAbs were produced as ascitic fluid, and ammonium sulfate-purified. Of these, two were able to prevent virion penetration into the cell after attachment. Three neutralizing McAbs were selected for use in immunoperoxidase tests for detecting BHV-1 in infected cell cultures.